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云南氣泡水飲料研發的配方研發機構
工藝操作要點
菌種分離篩選流程：采樣→增殖培養→平板分離→初篩-復篩-發酵實驗（終篩）→菌種保藏
采樣采樣就是從自然界中采集含有目的菌的樣品。
研究菌種從蜂蜜原料中采集、篩選?？紤]到今后工業化生產主要原料為油菜花蜂蜜因此本研究從油菜花蜂蜜中直接采樣。
增殖培養無菌條件下取5mL油菜花蜂蜜接種到已配制好的蜂蜜培養基中，置于恒溫振蕩培養箱中15℃
150rmin培養30d培養過程定期觀察并記錄。
平板分離將經增殖培養的樣品進行適當稀釋，涂布麥汁瓊脂平板，置于恒溫培養箱中25℃培養，定期觀察并記錄。
初篩挑取80株經過二次平板分離的酵母菌株采用艾氏管法測定其發酵能力每株菌接種1管，保留發酵能力較高的菌株20株。
復篩將選取的20株酵母菌再次接種艾氏管每株3管，測試其發酵能力，保留4株發酵能力較高的菌株。
發酵試驗：將復篩得到的4株酵母菌株接種于蜂蜜培養基28℃恒溫培養30d在發酵后期不斷對各個樣品進行感官品評同時進行部分理化指標的檢測并不斷觀察記錄。從中篩選出性能良好、適宜大生產的菌株1-2株。菌種的保藏將篩選得到的菌株接種于麥汁斜面置28℃恒溫箱中培養24h置4C冰箱中保存。
菌種的鑒定：選取篩選得到的2株發酵能力較強的酵母菌參照《酵母菌的特征與鑒定手冊》進行菌種鑒定1具體方法：
（1）細胞形態接種麥芽汁液體培養基28℃、150r/min培養24h制備水浸片顯微鏡檢觀察菌體形態。并通過電子顯微鏡觀察其菌體形態測定其細胞大小。
（2）菌落形態觀察將待測菌株在麥芽汁瓊脂培養基上平板劃線28℃培養觀察菌群形態特征。
（3）糖類發酵測定將欲鑒定的菌株分別接種于酵母碳源發酵管中25℃-28℃培養每天觀察結果。一般觀察2d-3d即可凡不發酵者或弱發酵者，可延長至觀察5d
（4）碳源同化試驗菌液制備將待測菌株制成菌懸液
（1mL無菌生理鹽水接入約1接種環的新培養的酵母菌制成的菌懸液）
平板制備將此菌懸液全部倒入經熔化并冷卻至45℃左右的同化碳源基礎培養基中使菌體在培養基中混和均勻靜置凝固后在28℃把培養皿倒置幾小時，使表面不致太濕。點樣在培養皿底部做上碳源名稱的標記分別用無菌不銹鋼匙或無菌藥匙按標記加糖少許（約米粒大）如結果不明顯可于第2d再補加一次糖。
觀察觀察結果時以葡萄糖作對照，一般是25℃-28℃培養1d-2d觀察結果凡能同化者在所加碳源的周圍形成生長圈。凡生長緩慢的酵母或是在測半乳糖同化時，可適當采用液體培養法，即在含某種碳源的液體培養基中接入酵母25℃-28℃培養1-2周以含葡萄糖的液體培養基作對照觀察酵母生長情況是否更加渾濁或形成環、島等必要時可延長至觀察3周。
（5）氨源同化試驗培養基的制備是將酵母菌無氮合成培養基熔化取無菌試管4支加入已熔的培養基5mL然后向其中的2只加入硝酸鉀滅菌制成斜面。
接種、培養將4支斜面培養基中都接入供試菌（2支沒有氮源的斜面試管作對照）置于28℃恒溫培養觀察。能觀察到菌體生長現象表明菌株可以同化該氮源。
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